双缩脲法测蛋白质含量

试验 双缩脲法下决心蛋清质浓度,,一、试验物镜 一。习得分光曝光计的规律和方式 2.其次步。习得蛋清质使满意下决心的规律和方式 3. 主人双缩脲法下决心蛋清质使满意的方式,二、规律,一、分光曝光计的基本规律和方式 (1)用吸取光谱法对有重大使发生举行定性剖析 一。基本,2.其次步。次要方式: (1)比得上吸取光谱角部 (2)比得上最大吸取波长 蛋清质的最大吸取波长为280n, 核蛋清质的最大吸取波长为260n。,(3)比得上吸广大系数 纯DNA,(2)用吸取光谱法对有重大使发生举行定量剖析,一。基本 Beer-Lambert(鸟嘴相接触)法制: T=I/I0 A=lg1/T=lgI0/I A=KCL 执政的:t是异体同形比。;A是吸广大。;I0是入射光的力量;i是异体同形光的力量; k是吸取系数;C为Aquarius水瓶座浓度;L是溶解物光径的厚度,2.其次步。经用方式 (1)规范角部法 规范角部不可避免的与S的下决心必要的分歧。,(2)规范管法 CX/AX=CS/AS,已知CS,砷的下决心、AX,可以接待cx。。 (3)防波堤吸取系数法 C=A/(为L=1cm,C为1 防波堤吸取系数,也称为防波堤吸取剂。,四、分光曝光计的应用,1.722分光曝光计的露面,2.其次步。法律文件开刀KE引见 做模特儿设置(做模特儿):用于设置结帐做模特儿 “100%T/0ABS”键:用于不自觉动作监听(透光系数)或0 abs(零吸广大 0%t键:不自觉动作调零 波长设置疙瘩:用于设置剖析小浪,三。战利品结帐开刀 ① 翻开馈路开关,把为演奏谱曲预热20分钟 ② 应用波长设置紧固件设置剖析W处的波长 ③ 翻开战利品室盖,将遮光罩拔出色度的比色的rac,推或拉到砸砸 ④ 盖住战利品室,按0%t键调异体同形比零 ⑤ 拆下挡纯洁质朴状态,盖住战利品室,将100%异体同形比苗条的为100%t ⑥ 按做模特儿将结帐做模特儿设置为吸广大做模特儿(A) ⑦ 将参比Aquarius水瓶座和被测Aquarius水瓶座倒入色度的比色的计中 ⑧ 翻开战利品室盖,将诈骗Aquarius水瓶座的色度的比色的皿拔出色度的比色的皿中,盖住战利品室 ⑨ 将会诊Aquarius水瓶座推入或拉入光学pat,经过100%t将A归零 ⑩ 将Aquarius水瓶座拉入光学pat,此刻,指示盘显示被测战利品的吸广大限制以代理商的身份行事 试验获得后,封闭电源,洗色度的比色的皿,盖上头等的。。,,,现场恢复,,光路,,现场恢复,,光路,,现场恢复,微量凯氏定氮法下决心总蛋清使满意,用co-hea表决下决心的自然渗氮合物做成某事氨,氨与蓝矾反响产品蓝矾铵。在克氏氮剖析中混录强碱性消化液,蓝矾铵表决制氨。成蒸汽上升使滴下法将氨蒸成无机酸Aquarius水瓶座,与用规范酸Aquarius水瓶座滴定,用于滴定的无机酸的量(防波堤)能与之比拟的东西,地基测得的氨使满意,sampl的氮使满意。 因蛋清质氮使满意通常是1 %摆布,因而我们家把用凯氏定氮法测得的氮使满意系数乘以,接待战利品的蛋清质使满意。,福林酚反应物法(洛瑞法)下决心蛋清质浓度,蛋清质诈骗两个上级的的肽键(-co-nh),合乎逻辑的推论是有双缩脲反响,在碱性Aquarius水瓶座中,含cu2的复合的。Folin酚反响是在双缩脲反响的根据,引见维生素B反应物(磷钼酸磷钨酸反应物,蛋清铜复合的对磷钼酸磷钨酸的复原功能,蓝色有重大使发生的成形。在必然必要的下,蓝色力量与蛋清质的数目成直接比。这种方式的优点是开刀复杂、敏感性高、比紫外线的线吸取敏感10-20倍,较双缩脲法敏捷100倍。缺陷是反响受到大多数人以代理商的身份行事的阻碍。,紫外线的分光广大法下决心蛋清质浓度,因蛋清质分子中酪氨酸和色氨基酸残基的苯环,合乎逻辑的推论是,蛋清质具有吸取紫外线的线的特点,吸取峰为280。 波长为十亿分之一公尺。在刚过去的波长搜索内,蛋清质Aquarius水瓶座的光吸取值(OD280)与其成直接比,可用于定量下决心。 紫外线的吸取法下决心蛋清质co的优点、手巧的、无战利品耗费,低浓度盐不阻碍下决心。,总蛋清bca的定量剖析 acid,二辛可宁酸、二羧基二喹啉),准确和敏感性:bca反应物下决心蛋清质的搜索为20-2000ug/ml;Micro bca反应物的下决心搜索为ug/ml 快:45分钟内获得下决心,比佛经的lowry方式快4倍,更便于使用的 节约的:试管除外,可在微孔板中举行下决心,节省战利品和反应物量 不受战利品中水合氢和非水合氢洗涤剂的使发生 意见分歧蛋清质分子的解体系数以内,基本规律: 碱性必要的下,蛋清质将cu2 复原为cu2, cu2 与bca反应物使成紫色复合的的成形,562n时吸取值的下决心,与规范角部比拟,可以锻炼待测蛋清质的浓度。,考马斯亮蓝能染上色法下决心蛋清质浓度,考马斯亮蓝在必然蛋清质浓度搜索内,蛋清质与染上或粘上的使化合适合鸟嘴相接触法制 ,合乎逻辑的推论是可以经过下决心染上或粘上在595nm处光吸取的征募新兵接待与其使化合的蛋清素养。方式复杂。、神速、较不重要的的阻碍有重大使发生、高敏感性(比Lowry方式敏捷4倍。,Coomassie 染上或粘上基 蛋清质定量,(二)双缩脲法下决心蛋清质 H2N-CO-NH2 + NH2-CO-NH2 H2N-CO-NH-CO-NH2 +NH3 双缩脲 双缩脲反响:双缩脲在碱性必要的下与铜水合氢使化合使成为不凋花调停,色与蛋清质浓度成直接比。 本法下决心1-10mg搜索内的蛋清质,,三、开刀行走 1.取15根试管,下表编号、添加反应物,,2.其次步。混合管道后,混录双缩脲反应物反响30min。 三。0号浴缸调零,测每个浴缸540nm的光吸取。,四、果实处置 一。绘制规范角部 牛浆液白蛋清使满意,OD540为纵坐标,绘制规范角部。 2.其次步。范本计算 战利品的蛋清质使满意(mg)由规范角部下决心,与地基大量o计算战利品浓度。 五、有关注意事项 一。待显色后30分钟内决定,也从色发展到各管状物色比得上的工夫。 2.其次步。战利品蛋清质使满意应在规范角部内。 三。色度的比色的杯的应用,

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