双缩脲法测蛋白质含量

试验 双缩脲法配给蛋清质浓度,,一、试验实体的 一。得知分光曝光计的规律和办法 2.瞬间步。得知蛋清质满足的配给的规律和办法 3. 了解双缩脲法配给蛋清质满足的的办法,二、规律,一、分光曝光计的基本规律和办法 (1)用吸取光谱法对物质的停止定性辨析 一。教义,2.瞬间步。次要办法: (1)比得上吸取光谱做出牺牲以获得 (2)比得上最大吸取波长 蛋清质的最大吸取波长为280n, 核蛋清质的最大吸取波长为260n。,(3)比得上吸量级比 纯DNA,(2)用吸取光谱法对物质的停止定量辨析,一。教义 Beer-Lambert(清单)法制: T=I/I0 A=lg1/T=lgI0/I A=KCL 采用:t是传送比。;A是吸量级。;I0是入射光的力度;i是传送光的力度; k是吸取系数;C为溶解浓度;L是溶解物光学距离的厚度,2.瞬间步。经用办法 (1)规范做出牺牲以获得法 规范做出牺牲以获得必然要与S的配给学期分歧。,(2)规范管法 CX/AX=CS/AS,已知CS,砷的配给、AX,可以承受cx。。 (3)间谍吸取系数法 C=A/(为L=1cm,C为1 间谍吸取系数,也称为间谍吸取剂。,四、分光曝光计的运用,1.722分光曝光计的形状,2.瞬间步。乐器使运行KE绍介 方式设置(方式):用于设置与试验有关的方式 “100%T/0ABS”键:用于自动行为控制(透光系数)或0 abs(零吸量级 0%t键:自动行为调零 波长设置给装球形把手:用于设置辨析微波,三。战利品与试验有关的使运行 ① 翻开馈路开关,把器官预热20分钟 ② 运用波长设置电钮设置辨析W处的波长 ③ 翻开战利品室盖,将遮光罩拔出色度的比色的rac,推或拉到一圈跑道 ④ 盖住战利品室,按0%t键调传送比零 ⑤ 拆下挡擦净的书写板,盖住战利品室,将100%传送比对准为100%t ⑥ 按方式将与试验有关的方式设置为吸量级方式(A) ⑦ 将参比溶解和被测溶解倒入色度的比色的计中 ⑧ 翻开战利品室盖,将富国溶解的色度的比色的皿拔出色度的比色的皿中,盖住战利品室 ⑨ 将参照溶解推入或拉入光学pat,经过100%t将A归零 ⑩ 将溶解拉入光学pat,此刻,指示盘显示被测战利品的吸量级参量 试验充分发挥潜在的能力后,结束当日广播电源,洗色度的比色的皿,盖上脱帽致意。。,,,返乡,,光路,,返乡,,光路,,返乡,微量凯氏定氮法配给总蛋清满足的,用co-hea决定配给的自然氮化的合物切中要害氨,氨与刻薄话反馈噪音制成品刻薄话铵。在克氏氮辨析中预强碱性消化液,刻薄话铵决定制氨。乘轮船旅行蒸流法将氨蒸成无机酸溶解,从此处用规范酸溶解滴定,用于滴定的无机酸的量(间谍)同样看待,比照测得的氨满足的,sampl的氮满足的。 由于蛋清质氮满足的通常是1 %摆布,因而咱们把用凯氏定氮法测得的氮满足的系数乘以,承受战利品的蛋清质满足的。,福林酚药剂法(洛瑞法)配给蛋清质浓度,蛋清质富国两个过去的的肽键(-co-nh),从此处有双缩脲反馈噪音,在碱性溶解中,含cu2的不正常的忧虑。Folin酚反馈噪音是在双缩脲反馈噪音的根据,绍介维生素BC药剂(磷钼酸磷钨酸药剂,蛋清铜不正常的忧虑对磷钼酸磷钨酸的复原功能,蓝色物质的的形状。在必然学期下,蓝色力度与蛋清质的定量成正比例。这种办法的优点是使运行复杂、感光度高、比紫外线辐射线吸取敏感10-20倍,较双缩脲法敏捷100倍。缺陷是反馈噪音受到很多地混乱的干预。,紫外线辐射分光量级法配给蛋清质浓度,由于蛋清质分子中酪氨酸和色氨基酸残基的苯环,从此处,蛋清质具有吸取紫外线辐射线的特点,吸取峰为280。 波长为十亿分之一公尺。在这么地波长射程内,蛋清质溶解的光吸取值(OD280)与其成正比例,可用于定量配给。 紫外线辐射吸取法配给蛋清质co的优点、手边的、无战利品耗费,低浓度盐不干预配给。,总蛋清bca的定量辨析 acid,二辛可宁酸、二羧基二喹啉),精度和感光度:bca药剂配给蛋清质的射程为20-2000ug/ml;Micro bca药剂的配给射程为ug/ml 快:45分钟内充分发挥潜在的能力配给,比文豪的lowry办法快4倍,更手边的 合算的:试管除外,可在微孔板中停止配给,节省战利品和药剂量 不受战利品中水合氢和非水合氢洗涤剂的有影响的人 变化多的蛋清质分子的变动系数决不,基本规律: 碱性学期下,蛋清质将cu2 复原为cu2, cu2 与bca药剂词藻华美的不正常的忧虑的形状,562n时吸取值的配给,与规范做出牺牲以获得比拟,可以弄明白待测蛋清质的浓度。,考马斯亮蓝颜料法配给蛋清质浓度,考马斯亮蓝在必然蛋清质浓度射程内,蛋清质与染色的嫁适合清单法制 ,从此处可以经过配给染色在595nm处光吸取的募集承受与其嫁的蛋清上流社会的。办法复杂。、神速、减去的干预物质的、高感光度(比Lowry办法敏捷4倍。,Coomassie 染色基 蛋清质定量,(二)双缩脲法配给蛋清质 H2N-CO-NH2 + NH2-CO-NH2 H2N-CO-NH-CO-NH2 +NH3 双缩脲 双缩脲反馈噪音:双缩脲在碱性学期下与铜水合氢嫁制作不凋花调和,色与蛋清质浓度成正比例。 本法配给1-10mg射程内的蛋清质,,三、使运行试图贿赂 一。取15根试管,下表编号、添加药剂,,2.瞬间步。混合管道后,预双缩脲药剂反馈噪音30min。 三。0号浴缸调零,测每个浴缸540nm的光吸取。,四、坐果处置 一。绘制规范做出牺牲以获得 牛树液白蛋清满足的,OD540为纵坐标,绘制规范做出牺牲以获得。 2.瞬间步。范本计算 战利品的蛋清质满足的(mg)由规范做出牺牲以获得配给,从此处比照充其量的o计算战利品浓度。 五、有关注意事项 一。待显色后30分钟内决定,也从色发展到各不及格色比得上的工夫。 2.瞬间步。战利品蛋清质满足的应在规范做出牺牲以获得内。 三。色度的比色的杯的运用,

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