双缩脲法测蛋白质含量

试验 双缩脲法计算蛋白状黏液质浓度,,一、试验决意 一。习得分光曝光计的规律和办法 2.第二的步。习得蛋白状黏液质满意的计算的规律和办法 3. 精通的双缩脲法计算蛋白状黏液质满意的的办法,二、规律,一、分光曝光计的基本规律和办法 (1)用吸取光谱法对物质的举行定性辨析 一。基音的,2.第二的步。首要办法: (1)有点吸取光谱轮廓 (2)有点最大吸取波长 蛋白状黏液质的最大吸取波长为280n, 核素的最大吸取波长为260n。,(3)有点吸光明系数 纯DNA,(2)用吸取光谱法对物质的举行定量辨析,一。基音的 Beer-Lambert(钞票)诉诸法律: T=I/I0 A=lg1/T=lgI0/I A=KCL 内侧的:t是相同比。;A是吸光明。;I0是入射光的内涵;i是相同光的内涵; k是吸取系数;C为酒浓度;L是溶解物光径的厚度,2.第二的步。经用办法 (1)规范轮廓法 规范轮廓必需与S的计算使习惯于划一。,(2)规范管法 CX/AX=CS/AS,已知CS,砷的计算、AX,可以设法对付cx。。 (3)防波堤吸取系数法 C=A/(为L=1cm,C为1 防波堤吸取系数,也称为防波堤吸取剂。,四、分光曝光计的应用,1.722分光曝光计的身材,2.第二的步。计量仪功能KE引见 文字设置(文字):用于设置测验文字 “100%T/0ABS”键:用于自发地校正(透光系数)或0 abs(零吸光明 0%t键:自发地调零 波长设置鼓起:用于设置辨析小浪,三。战利品测验功能 ① 翻开电力开关,把用仪器装备预热20分钟 ② 应用波长设置紧固件设置辨析W处的波长 ③ 翻开战利品室盖,将遮光罩拔出色度的比色的rac,推或拉到一圈跑道 ④ 盖住战利品室,按0%t键调相同比零 ⑤ 拆下挡纯洁质朴状态,盖住战利品室,将100%相同比校正为100%t ⑥ 按文字将测验文字设置为吸光明文字(A) ⑦ 将参比酒和被测酒倒入色度的比色的计中 ⑧ 翻开战利品室盖,将有酒的色度的比色的皿拔出色度的比色的皿中,盖住战利品室 ⑨ 将适用于酒推入或拉入光学pat,经过100%t将A归零 ⑩ 将酒拉入光学pat,此刻,显示器荧光屏显示被测战利品的吸光明限制错杂 试验使完满后,亲密的电源,洗色度的比色的皿,盖上炮弹。。,,,循环,,光路,,循环,,光路,,循环,微量凯氏定氮法计算总蛋白状黏液满意的,用co-hea讲解计算的自然使氮复合达到目标氨,氨与蓝矾反响产额蓝矾铵。在克氏氮辨析中厕强碱性消化液,蓝矾铵讲解制氨。发怒提炼法将氨蒸成无机酸酒,去用规范酸酒滴定,用于滴定的无机酸的量(防波堤)能与之比拟的东西,基本原则测得的氨满意的,sampl的氮满意的。 由于蛋白状黏液质氮满意的通常是1 %摆布,因而咱们把用凯氏定氮法测得的氮满意的系数乘以,设法对付战利品的蛋白状黏液质满意的。,福林酚反应物法(洛瑞法)计算蛋白状黏液质浓度,蛋白状黏液质有两个上级的的肽键(-co-nh),去有双缩脲反响,在碱性酒中,含cu2的复杂的。Folin酚反响是在双缩脲反响的根据,引见福怀特反应物(磷钼酸磷钨酸反应物,蛋白状黏液铜复杂的对磷钼酸磷钨酸的复原功能,蓝色物质的的结构。在必然使习惯于下,蓝色内涵与蛋白状黏液质的量成直接比。这种办法的优点是功能简略、敏感性高、比紫外线辐射线吸取敏感10-20倍,较双缩脲法敏捷100倍。缺陷是反响受到多的错杂的干预。,紫外线辐射分光光明法计算蛋白状黏液质浓度,由于蛋白状黏液质分子中酪氨酸和色氨基酸残基的苯环,去,蛋白状黏液质具有吸取紫外线辐射线的特点,吸取峰为280。 波长为十亿分之一公尺。在这时波长射程内,蛋白状黏液质酒的光吸取值(OD280)与其成直接比,可用于定量计算。 紫外线辐射吸取法计算蛋白状黏液质co的优点、便于使用的、无战利品消费,低浓度盐不干预计算。,总蛋白状黏液bca的定量辨析 acid,二辛可宁酸、二羧基二喹啉),精度和敏感性:bca反应物计算蛋白状黏液质的射程为20-2000ug/ml;Micro bca反应物的计算射程为ug/ml 快:45分钟内使完满计算,比圣典的lowry办法快4倍,更手边的 节约的:试管除外,可在微孔板中举行计算,节省战利品和反应物量 不受战利品中水合氢和非水合氢洗涤剂的假装 不同的蛋白状黏液质分子的改变系数没有,基本规律: 碱性使习惯于下,蛋白状黏液质将cu2 复原为cu2, cu2 与bca反应物帝位复杂的的结构,562n时吸取值的计算,与规范轮廓比拟,可以锻炼待测蛋白状黏液质的浓度。,考马斯亮蓝着色法计算蛋白状黏液质浓度,考马斯亮蓝在必然蛋白状黏液质浓度射程内,蛋白状黏液质与颜料的联合契合钞票诉诸法律 ,去可以经过计算颜料在595nm处光吸取的募集设法对付与其联合的蛋白状黏液块。办法简略。、神速、较少地的干预物质的、高敏感性(比Lowry办法敏捷4倍。,Coomassie 颜料基 蛋白状黏液质定量,(二)双缩脲法计算蛋白状黏液质 H2N-CO-NH2 + NH2-CO-NH2 H2N-CO-NH-CO-NH2 +NH3 双缩脲 双缩脲反响:双缩脲在碱性使习惯于下与铜水合氢联合产生茄子复合,色与蛋白状黏液质浓度成直接比。 本法计算1-10mg射程内的蛋白状黏液质,,三、功能测度 1.取15根试管,下表编号、添加反应物,,2.第二的步。混合管道后,厕双缩脲反应物反响30min。 三。0号浴缸调零,测每个浴缸540nm的光吸取。,四、发生处置 1.绘制规范轮廓 牛树液清蛋白状黏液满意的,OD540为纵坐标,绘制规范轮廓。 2.第二的步。范本计算 战利品的蛋白状黏液质满意的(mg)由规范轮廓计算,去基本原则大多数o计算战利品浓度。 五、有关注意事项 一。待显色后30分钟内决定,连同从色发展到各地铁色有点的工夫。 2.第二的步。战利品蛋白状黏液质满意的应在规范轮廓内。 三。色度的比色的杯的应用,

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