双缩脲法测蛋白质含量

试验 双缩脲法分配蛋清质浓度,,一、试验瞄准 一。竞争分光曝光计的规律和方式 2.居第二位的步。竞争蛋清质使满意分配的规律和方式 3. 急于接受双缩脲法分配蛋清质使满意的方式,二、规律,一、分光曝光计的基本规律和方式 (1)用吸取光谱法对原料举行定性剖析 1.教义,2.居第二位的步。次要方式: (1)较比吸取光谱弯曲 (2)较比最大吸取波长 蛋清质的最大吸取波长为280n, 核蛋清质的最大吸取波长为260n。,(3)较比吸发光比率 纯DNA,(2)用吸取光谱法对原料举行定量剖析,1.教义 Beer-Lambert(账单)法: T=I/I0 A=lg1/T=lgI0/I A=KCL 在监狱里:t是经过比。;A是吸发光。;I0是入射光的说服力;i是经过光的说服力; k是吸取系数;C为答案浓度;L是溶解物光径的厚度,2.居第二位的步。经用方式 (1)基准弯曲法 基准弯曲必然与S的分配资格分歧。,(2)基准管法 CX/AX=CS/AS,已知CS,砷的分配、AX,可以增加cx。。 (3)痣吸取系数法 C=A/(为L=1cm,C为1 痣吸取系数,也称为痣吸取剂。,四、分光曝光计的运用,1.722分光曝光计的长,2.居第二位的步。为演奏谱曲使运行KE绍介 塑造设置(塑造):用于设置测验塑造 “100%T/0ABS”键:用于无意识的监控人员(透光系数)或0 abs(零吸发光 0%t键:无意识的调零 波长设置给装球形把手:用于设置剖析小浪,三。战利品测验使运行 ① 翻开馈路开关,把工具预热20分钟 ② 运用波长设置电钮设置剖析W处的波长 ③ 翻开战利品室盖,将遮光罩拔出色度的比色的rac,推或拉到扔出 ④ 盖住战利品室,按0%t键调经过比零 ⑤ 拆下挡擦净的书写板,盖住战利品室,将100%经过比调理为100%t ⑥ 按塑造将测验塑造设置为吸发光塑造(A) ⑦ 将参比答案和被测答案倒入色度的比色的计中 ⑧ 翻开战利品室盖,将有产者答案的色度的比色的皿拔出色度的比色的皿中,盖住战利品室 ⑨ 将请教答案推入或拉入光学pat,经过100%t将A归零 ⑩ 将答案拉入光学pat,此刻,指示盘显示被测战利品的吸发光决定做代理商 试验取得后,亲近的电源,洗色度的比色的皿,盖上领导。。,,,归还,,光路,,归还,,光路,,归还,微量凯氏定氮法分配总蛋清使满意,用co-hea下决定分配的自然渗氮合物切中要害氨,氨与刻薄话浮动诊胎法创作刻薄话铵。在克氏氮剖析中同意强碱性消化液,刻薄话铵下决定制氨。疾行使渗出法将氨蒸成无机酸答案,与用基准酸答案滴定,用于滴定的无机酸的量(痣)折合,基础测得的氨使满意,sampl的氮使满意。 由于蛋清质氮使满意通常是1 %摆布,因而朕把用凯氏定氮法测得的氮使满意系数乘以,增加战利品的蛋清质使满意。,福林酚反应物法(洛瑞法)分配蛋清质浓度,蛋清质有产者两个以上所述的肽键(-co-nh),像这样有双缩脲浮动诊胎法,在碱性答案中,含cu2的建筑群。Folin酚浮动诊胎法是在双缩脲浮动诊胎法的根据,绍介福怀特反应物(磷钼酸磷钨酸反应物,蛋清铜建筑群对磷钼酸磷钨酸的复原功能,蓝色原料的长。在必然资格下,蓝色说服力与蛋清质的等于成反比。这种方式的优点是使运行复杂、感光度高、比产生紫外线的线吸取敏感10-20倍,较双缩脲法敏捷100倍。错误是浮动诊胎法受到许多的做代理商的阻止。,产生紫外线的分光发光法分配蛋清质浓度,由于蛋清质分子中酪氨酸和色氨基酸残基的苯环,像这样,蛋清质具有吸取产生紫外线的线的特点,吸取峰为280。 波长为毫微米。在这么地波长范畴内,蛋清质答案的光吸取值(OD280)与其成反比,可用于定量分配。 产生紫外线的吸取法分配蛋清质co的优点、简便的、无战利品消费,低浓度盐不阻止分配。,总蛋清bca的定量剖析 acid,二辛可宁酸、二羧基二喹啉),准确和感光度:bca反应物分配蛋清质的范畴为20-2000ug/ml;Micro bca反应物的分配范畴为ug/ml 快:45分钟内取得分配,比第一流的的lowry方式快4倍,更便利 节约的:试管除外,可在微孔板中举行分配,节省战利品和反应物量 不受战利品中水合氢和非水合氢洗涤剂的引起 确切的蛋清质分子的改变系数决不,基本规律: 碱性资格下,蛋清质将cu2 复原为cu2, cu2 与bca反应物蓝紫色建筑群的长,562n时吸取值的分配,与基准弯曲比拟,可以了解某人的本质待测蛋清质的浓度。,考马斯亮蓝染上或粘上法分配蛋清质浓度,考马斯亮蓝在必然蛋清质浓度范畴内,蛋清质与着色剂的使结合适合账单法 ,像这样可以经过分配着色剂在595nm处光吸取的募集增加与其使结合的蛋清技能。方式复杂。、神速、较少地的阻止原料、高感光度(比Lowry方式敏捷4倍。,Coomassie 着色剂基 蛋清质定量,(二)双缩脲法分配蛋清质 H2N-CO-NH2 + NH2-CO-NH2 H2N-CO-NH-CO-NH2 +NH3 双缩脲 双缩脲浮动诊胎法:双缩脲在碱性资格下与铜水合氢使结合形成倒挂金钟属植物使严重,色与蛋清质浓度成反比。 本法分配1-10mg范畴内的蛋清质,,三、使运行步 一。取15根试管,下表编号、添加反应物,,2.居第二位的步。混合管道后,同意双缩脲反应物浮动诊胎法30min。 三。0号浴缸调零,测每个浴缸540nm的光吸取。,四、归结为处置 1.绘制基准弯曲 牛乳清白蛋清使满意,OD540为纵坐标,绘制基准弯曲。 2.居第二位的步。范本计算 战利品的蛋清质使满意(mg)由基准弯曲分配,与基础充其量的o计算战利品浓度。 五、有关注意事项 一。待显色后30分钟内决定,与从色发展到各电视机色较比的时期。 2.居第二位的步。战利品蛋清质使满意应在基准弯曲内。 三。色度的比色的杯的运用,

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